臺盼藍染色原理
臺盼藍(Trypan blue)是一種細胞活性染料,常用于細胞計數和細胞活力檢測。它可以通過細胞膜進入細胞,并與細胞內的核酸結合,使細胞呈現藍色。對于喪失活性或細胞膜不完整的細胞,其細胞膜通透性增加,臺盼藍染料可以進入細胞內,使細胞染成藍色。通過觀察被染成藍色細胞的數量,即可得出對應的細胞濃度。
細胞計數的操作流程
1-準備工作
·準備細胞懸液:將待檢測的細胞培養至適當濃度,收集細胞并制備成細胞懸液。
·準備臺盼藍染料:將0.4臺盼藍染料用PBS緩沖液稀釋至0.2%。
·準備細胞計數儀和計數板:使用全自動細胞計數儀(JSY-SC-031H)和血細胞計數板、蓋玻片進行細胞計數。
·準備移液器和吸頭:使用移液器和吸頭吸取細胞懸液和臺盼藍染料。
2-加入臺盼藍染料
·取適量的細胞懸液與離心管中。
·加入等量的臺盼藍染料(0.2%),再用移液槍輕輕吹打混勻。
3-上機檢測
·用移液器取10uL細胞混合液,加入血細胞計數板中。
·將加樣后的血細胞計數板放至細胞計數儀(JSY-SC-031H)的載物臺上,選擇對應的計數模式,即可開始細胞計數分析(濃度計算公式=(四個大方格內細胞數之和)/4×(稀釋倍數)×104)。
4-查看結果數據
計數完成后,點擊數據詳情,查看細胞濃度、細胞直徑、細胞聚團率等數據。
注意事項
1-臺盼藍染料具有一定毒性,操作時需佩戴手套和口罩,避免接觸皮膚和吸入氣體。
2-臺盼藍染料需避光保存,避免陽光直射。
3-臺盼藍染料適用于大多數細胞類型,但無法很好的區分細胞和雜質,因此不適用于原代細胞、PBMC等含有大量雜質碎片的細胞類型。
4-加樣前,可將臺盼藍靜置數分鐘,取上層。
5-加樣時,應盡量避免氣泡的產生,以免影響細胞計數的結果。
臺盼藍染料是一種常用的細胞活性染料,可用于細胞計數和活力檢測。在使用臺盼藍染料進行細胞計數時,需要注意操作流程和注意事項,以確保結果的準確性。
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